اسدالله مدنی در ۱۲۹۳ در آذرشهر از توابع تبریز، به دنیا آمد و در چهار سالگی مادر خود را از دست داد و نزد نامادری و پدرش آقا میر علی بزرگ شد.
شهید مدنی دروس ابتدایی علوم دینی را در حوزه علمیه یزد فراگرفت و برای ادامهٔ تحصیل عازم قم شد و در آن جا تحصیلات خود را به پایان رساند. وقتی نواب صفوی مصمم به مبارزهٔ مسلحانه شد، در تهیهٔ اسلحه وی را یاری کرد. سپس چندین سال در حوزهٔ علمیهٔ نجف به تدریس مشغول گشت. در حوزهٔ نجف در بین دوستان آیت الله مدنی معروف بود که «اسلحه‌ای که نواب صفوی تهیه کرد با پول کتاب‌های مدنی بود.» از جمله شاگردان او در این دوره می‌توان به عارف حسینی اشاره نمود.
در ۱۳۴۹ به ایران بازگشت و بر اثر مخالفت با حکومت پهلوی دوم به کنگان تبعید شد. پس از پیروزی انقلاب ۱۳۵۷ ایران به نمایندگی از همدان به مجلس خبرگان راه یافت و بعداً به عنوان امام جمعه تبریز منصوب شد.
مدنی سرانجام در ۲۱ شهریورماه ۱۳۶۰ در حال اقامهٔ نماز جمعه ترور شد. مسئولیت ترور او را سازمان مجاهدین خلق ایران بر عهده گرفت.